Где смотреть результат пцр РК

Здравствуйте, в этой статье мы постараемся ответить на вопрос: «Где смотреть результат пцр РК». Также Вы можете бесплатно проконсультироваться у юристов онлайн прямо на сайте.

ПЦР-тест на COVID-19 необходим, если:

• У вас есть симптомы COVID-19, такие как жар, кашель, усталость или затрудненное дыхание.
• У вас нет симптомов, но у вас был тесный контакт (в пределах 1,5 м в общей сложности 15 минут или более) с кем-то, у кого положительный результат теста на вирус COVID-19 или есть подозрение на его наличие.

Ваш врач, другой медицинский работник или отдел общественного здравоохранения порекомендуют пройти тест. Определенные группы считаются высокоприоритетными для диагностического тестирования. К ним относятся люди с признаками и симптомами COVID-19, которые:

• Работают в медицинском учреждении или в качестве служб быстрого реагирования.
• Живут или работают в учреждениях долгосрочного ухода, таких как дома престарелых, или других местах, где люди проживают вместе, например, в тюрьмах или приютах.
• Находятся на лечении в больнице.

Другим людям может быть предоставлен приоритет для тестирования в зависимости от рекомендаций местного департамента здравоохранения по мониторингу COVID-19 в отдельных сообществах.

Как работает ПЦР тест на коронавирус

ПЦР проводится в 3 основных этапа. Эти три шага повторяются в течение 30 или 40 циклов. Циклы выполняются на автоматическом циклическом устройстве, которое быстро нагревает и охлаждает пробирки, содержащие реакционную смесь.

Каждый этап – денатаурация (изменение структуры), отжиг (соединение) и растяжение — происходит при разной температуре:

1. Денатурация: при 94 ° C (201,2 F) двухцепочечная ДНК плавится и раскрывается на два фрагмента одноцепочечной ДНК.
2. Отжиг: при средних температурах, около 54 ° C (129,2 F), праймеры образуют пары (отжиг) с одноцепочечной «матрицей» (матрица — это последовательность ДНК, которую нужно скопировать). На небольшой длине двухцепочечной ДНК (объединенный праймер и шаблон), полимераза присоединяется и начинает копировать шаблон.
3. Удлинение: при 72 ° C (161,6 ° F) лучше всего работает полимераза, и строительные блоки ДНК, комплементарные матрице, соединяются с праймером, образуя двухцепочечную молекулу ДНК.

Для диагностического теста на COVID-19 медицинский работник берет образец слизи из носа, горла или образец слюны. Образец, необходимый для диагностического тестирования, можно взять в кабинете врача, в медицинском учреждении, в центре тестирования или на дому (а некоторых ситуациях выезд лаборанта возможен на дом). Рекомендуется использовать длинный мазок из носа (мазок из носоглотки), хотя мазок из зева приемлем. Врач или другой медицинский работник вставляет в нос пациента тонкую гибкую палочку с ватой на кончике или проводит тампоном по задней стенке горла, чтобы собрать образец слизи. Это может быть несколько неприятно. Что касается пробы из носа, мазок может производиться в обеих ноздрях, чтобы собрать достаточно слизи для анализа. Тампон ненадолго остается на месте, прежде чем его осторожно поворачивают при извлечении. Образец герметично закрывается в пробирке и отправляется в лабораторию для анализа.

Технические проблемы, включая загрязнение во время отбора проб (например, тампон случайно касается загрязненной перчатки или поверхности), загрязнение ампликонами ПЦР, загрязнение реагентов, перекрестное загрязнение образца и перекрестные реакции с другими вирусами или генетическим материалом — основные причины ложных результатов исследования.

Но кроме технических проблем на информативность исследования влияет правильная подготовка. Пациент должен быть проинформирован о том, что за 4 часа до тестирования он не может курить, есть, жевать жвачку, чистить зубы или полоскать рот ополаскивателем.

1. Высокая специфичность. Метод ПЦР определяет заданную последовательность нуклеотидов, присущую конкретному патогену. Таким образом, специфичность теста стремится к 100%. Исключен риск ложноположительных результатов.
2. Чувствительность. Для ПЦР достаточно всего несколько молекул ДНК патогена (или даже уже неактивных – разрушенных вирусных частиц, сохранивших специфические участки ДНК в достаточном количестве), чтобы он был обнаружен в ходе исследования.
3. Скорость проведения. Лаборатория получает результат ПЦР-теста через несколько часов, клиент – уже на следующий день. Скорость диагностики имеет принципиально важное значение для своевременного лечения. Например, при диагностике бактериальных инфекций классический посев занимает от нескольких дней, а с ПЦР-анализом пациент сможет принять меры и начать лечение уже через сутки.
4. Универсальность. Для исследования подходит любой биоматериал: кровь, моча, сперма, мокрота, гной, жидкости из абсцессов и пр. Кроме этого, ПЦР применяется в самых разных областях науки и медицины, работая даже там, где другие методы бессильны.
5. Диагностика латентных инфекций. ПЦР-диагностика определяет возбудителя инфекции даже в инкубационном периоде и при скрытом течении заболевания.

ПЦР-тестирование: как работает метод ПЦР в диагностике

ПЦР – один из наиболее востребованных способов диагностики в медицине, и применяется он в самых разных областях:

• Диагностика инфекционных заболеваний (гепатит, ВИЧ, TORCH-инфекции и огромное множество других видов патогенов).
• Урогинекология (диагностика инфекций, передающихся половым путем: хламидиоз, уреаплазма, микоплазма, кандиды, гарднерелла, герпесвирусы). Важное значение для женского и мужского здоровья играет ВПЧ – вирус папилломы человека. Доказано, что у женщин онкогенные штаммы этого вируса способны вызывать рак шейки матки.
• Неонатология. Существует целый ряд инфекций, способных поражать плод еще в материнской утробе. Среди них вирусы герпеса, токсоплазмы, краснухи. ПЦР-диагностика позволяет правильно определить тактику ведения и риски внутриутробной инфекции.
• Респираторные заболевания. Диагностика методом ПЦР стала в 2020 году актуальной как никогда и продемонстрировала свою незаменимость и эффективность. ПЦР-анализ – главный тест и «золотой стандарт» диагностики коронавирусной инфекции Sars-Cov-2 (COVID-19), ставшей причиной самой масштабной пандемии последних десятилетий.
• Генетика. Наследственные заболевания и отцовство также диагностируются при помощи метода ПЦР.

Еще одно немаловажное преимущество ПЦР-анализов – это отсутствие специфической подготовки к проведению тестов. Достаточно следовать стандартным рекомендациям специалиста:

• Анализ сдается утром натощак. При этом ряд генетических исследований проводится в произвольное время, удобное пациенту.
• При сдаче анализа по мазку из ротоглотки необходимо выдержать интервал с приемом пищи и воды в 3-4 часа перед тестом.
• Перед анализом на венерические инфекции необходимо воздержаться от половой активности в течение суток.
• Перед анализом нельзя использовать никакие противовирусные препараты.

Подробную инструкцию по правилам подготовки к каждому анализу вы всегда можете получить у лечащего врача или у консультантов на нашей горячей линии.

С 1983 года, когда был изобретен данный метод, прошло много времени, и технологии не стоят на месте. Сегодня существует несколько различных методик для проведения ПЦР-теста:

1. С обратной транскрипцией. Самый распространенный способ идентификации известной последовательности РНК, включающий амплификацию, определение патогена и его идентификации среди образцов, хранящихся в научной картотеке.
2. Вложенная ПЦР (или «гнездовая») — используется для снижения количества неспецифичных продуктов реакции и имеет две стадии с использованием двух видов праймеров.
3. Изотермические методы – не требуют повторяющихся температурных циклов, менее энергозатратны.
4. Инвертированная ПЦР — применяется, если имеется только короткий фрагмент известной последовательности, но необходимо определить соседние последовательности после вставки ДНК в геном.
5. ПЦР в реальном времени — метод, позволяющий определить не только присутствие целевой нуклеотидной последовательности в образце, но и измерять количество ее копий после каждого цикла амплификации, что дает возможность для проведения тестов с количественным результатом

Это далеко не все существующие на сегодняшний день разновидности ПЦР-технологий. Ученые активно развивают эту важную и перспективную область лабораторной диагностики, совершенствуют методы ПЦР, оттачивают техники и изобретают новые подходы.

Установите приложение Saqbol на свой смартфон, включите Bluetooth и постоянно носите телефон с собой. При близком контакте с другими людьми, у которых также установлено приложение Saqbol, ваши смартфоны обмениваются зашифрованными идентификаторами, через Bluetooth. Каждая контрольная сумма идентификатора автоматически удаляется с устройства пользователя через две недели после ее создания.

После сдачи ПЦР теста, пользователю на мобильный номер придет смс сообщение с 10-значным кодом, который можно ввести в приложении Saqbol, чтобы узнать результат.

Если пользователь приложения Saqbol получает положительный результат на коронавирус, он может активировать функцию уведомления в своем приложении. Это предупредит других пользователей приложения, контактировавших с инфицированным человеком в течение последних 14 дней на расстоянии менее двух метров и в течение более 15-ти минут.

При активации уведомления приложение автоматически и анонимно уведомляет об этом других пользователей приложения.

Пользователи, получившие уведомление, в приложении могут ознакомиться с рекомендациями Министерства здравоохранения Республики Казахстан о дальнейших действиях.

Перед использованием приложения ознакомьтесь с Пользовательским соглашением и Политикой конфиденциальности.

Уважаемый пользователь!

Убедитесь, что NCALayer запущен/установлен и повторите попытку.

Инструкция по запуску программы

Для дальнейшей работы с egov.kz Вам необходимо установить сертификат Национального удостоверяющего центра Республики Казахстан.

Уважаемый пользователь!

Убедитесь, что NCALayer запущен/установлен и повторите попытку.

Инструкция по запуску программы

Получение результатов ПЦР анализа на COVID-19 онлайн

Коронавирус 2 или SARS-CoV-2 (или просто коронавирус) с острым тяжелым респираторным синдромом – это РНК-вирус, вызывающий заболевание COVID-19. PCR-RT, или сокращенно ПЦР, является основным методом тестирования на это инфекционное заболевание во всем мире, и ежедневные положительные статистические данные используются для моделирования распространения инфекции и определения того, наскольно будут закрыты страны.

По официальным данным, использование теста ПЦР объясняется следующим образом:

Обнаружение вирусной РНК используется как в Эстонии, так и во всем мире для первичной диагностики COVID-19 и выявления инфекций. В пользу теста говорит возможность обнаружить вирус на ранней стадии, это помогает сразу же ввести карантин. Еще одно преимущество – надежный результат: тест очень чувствителен (определяет даже небольшое количество вируса) и специфичен.

Вирусная РНК может быть определена с помощью так называемого классического метода ПЦР в реальном времени (полимеразная цепная реакция), который требует специального оборудования, специально обученных лабораторных специалистов и адаптированного лабораторного процесса. Аналогичный метод используется в лабораториях Департамента здравоохранения, SYNLAB и нескольких больниц, и таким образом можно проводить относительно крупномасштабные исследования.

Однако в то время, когда мы сталкиваемся с закрытиями бизнесов и ограничениями, которые представляют собой прямое нарушение основных прав человека и свобод и наносят необратимый ущерб экономике в целом в глобальном масштабе, жизненно важно понимать истинную природу ПЦР-анализа и связанных с ним манипуляций с данными в диагностике коронавируса.

RT-PCR признан золотым стандартом тестирования на коронавирус, что уже в корне неверно. По сути, «золотой стандарт» означает наиболее точный из всех доступных методов, но у теста, специально разработанного для обнаружения вируса SARS-CoV-2, имеется множество недостатков и несоответствий. Нельзя считать дефектный тест золотым стандартом. Остановка на всех этих тонких нюансах ПЦР теста была бы слишком долгой и была бы ограничена здесь основными важными факторами в контексте тестирования на коронавирус.

Следует понимать, что, несмотря на то, что официально было заявлено: «коронавирус был обнаружен», ни один ПЦР не способен ОБНАРУЖИТЬ вирус (тем более вирусное заболевание) как таковой. В ходе ПЦР БЫЛ ОБНАРУЖЕН и ВОСПРОИЗВЕДЕН только генетический материал вируса, но не сам вирус!

Тем не менее, вирус обнаруживается с помощью ряда взаимно поддерживающих методов. После амплификации образца вируса человека (ПЦР) полученный продукт ДНК также должен быть протестирован (например, с помощью блоттинга, секвенирования и т. д.) и продемонстрирован на активность, то есть инфекционность и / или вирулентность (например, культура клеток, клинические симптомы и т. Д.) .). Тогда мы могли в какой-то мере говорить об обнаружении, заражении и болезни.

Инфекционность – способность вируса распространяться среди хозяев (= заражать других).

Вирулентность – способность вируса заразить или повредить хозяина (= заболеть самому).

Все анализы RT-PCR на коронавирус, доступные в настоящее время от известных производителей, основаны на публикации Кормана-Дростена. ВОЗ, CDC и т. д. также следуют ему в своих инструкциях и распоряжениях. Важным моментом является то, что вся работа Кормана-Дорстена основана на теоретической последовательности ДНК коронавируса. Другими словами, предполагается, что новый вирус похож на предыдущий SARS-CoV (2003) и на основании этого была создана гипотетическая последовательность ДНК SARS-CoV-2, из которой был создан весь протокол.

Первоначально из-за отсутствия реального вирусного материала этот шаг был понятен, а в некоторых случаях даже оправдан. Однако в текущей ситуации, когда настоящий вирус может быть легко изолирован, протокол должен быть согласован с действительной последовательностью вирусной ДНК. Само по себе генетическое родство не может являться предпосылкой к достоверному тестированию (не говоря уже о золотом стандарте), поскольку перекрестная реактивность неизбежно приводит к ложноположительным результатам.

Однако до настоящего времени этого всего не было сделано, и положительные контроли для ПЦР-анализов все еще содержат последовательность искусственной ДНК SARS-Cov-2, которая основана только на гипотезе. Таким образом, в настоящий момент просто предполагается, что люди тестируются на вирус SARS-CoV-2.

Еще один важный аспект тестирования на коронавирус – это цель тестирования. Предполагая, что даже если гипотетическая последовательность преуспеет в создании 100% идентичной последовательности SARS-CoV-2, только определенные участки ДНК вируса будут нацелены на тестирование на коронавирус, и примерно половина вируса фактически не будет обнаружена. Другими словами, обнаруживаются и размножаются вирусные фрагменты, а не последовательность вирусной ДНК в целом.

С точки зрения лабораторных исследований самого вируса и его функций такой подход сам по себе вполне уместен. Однако использование разработанного таким образом теста ПЦР для первоначальной диагностики COVID-19 и выявления инфекции является весьма преждевременным и поверхностным.

Активный или способный инфецировать вирус работает как единое целое, но отдельные фрагменты вируса обычно неактивны и безвредны. Однако бывают ситуации, когда инактивированный вирусный фрагмент сохраняет свою функциональность и может вызвать некоторые повреждения в организме, если при благоприятных условиях такой фрагмент транспортируется в клетку. Однако такие случаи довольно редки, и организм прекрасно справляется с этим самостоятельно.

Таким образом, присутствие вирусного фрагмента в организме НЕ ПОДТВЕРЖДАЕТ наличие реального вируса, а просто указывает на то, что произошло взаимодействие с вирусным материалом. В этом случае найденный вирусный фрагмент может уже быть разбит на более мелкие единицы и функционально не нести никакого вреда.

Люди ежедневно подвергаются воздействию огромного количества различных вирусных материалов. Если предположить, что коронавирус – это быстро распространяющийся вирус, вероятность контакта с летучими частицами SARS-CoV-2 также довольно высока. В эпидемиологии время является критическим фактором, и необходимы быстрые ответные меры для ограничения распространения инфекционных заболеваний. Если в результате ПЦР у субъекта были обнаружены фрагменты коронавируса, было бы разумно изолировать его на несколько дней, при этом необходимо провести последующее наблюдение за обнаруженными фрагментами и продемонстрировать, что найденные фрагменты также являются инфекционными или вирулентными.

В результате гиперчувствительного ПЦР теста невозможно быть уверенным, какой из положительных результатов действительно положительный и человек действительно заразился. Также это ставит под сомнение смертность от коронавируса.

Поэтому чрезвычайно важно, чтобы количество циклов было намного меньше, чем оно было до сих пор, чтобы отличать ложно-положительные результаты от истинно-положительных. Это также поможет выявить среди людей с позитивным тестом людей с высокой и низкой вирусной нагрузкой, чтобы потом выявить заразных и незаразных.

Тест ПЦР также может выявить положительный результат при низкой и чрезмерно усиленной амплификации. Если при этом признаков заболевания нет, такого человека сразу объявляют бессимптомным по инструкции Terviseamet. Фактически, это здоровый человек, который безопасен для себя и других, потому что функционирующая иммунная система может хорошо справляться с небольшой и средней вирусной нагрузкой. Таким образом, здорового человека называют больным.

Человек, у которого нет никаких признаков заболевания, но имеет высокую вирусную нагрузку, может считаться бессимптомным. Уменьшение количества циклов ПЦР позволило бы оценить вирусную нагрузку, но важный вопрос: является ли вирус инфекционным и / или вирулентным?

Сам по себе ПЦР анализ не может ответить на этот вопрос, и для окончательной оценки (включая необходимось изоляции человека) необходимо провести дополнительные исследования.

Правильно откалиброванные тесты ПЦР имеют законное место для изучения инфекционных заболеваний. Однако только ПЦР тест не может обнаружить коронавирус. Таким образом, чрезвычайно важно анализировать результаты ПЦР наряду с другими вспомогательными методами. Только тогда можно будет сделать обоснованные выводы о распространении инфекции и так далее.

Неправильно откалиброванные тесты влияют на множество статистических данных, включая бессимптомных больных, распространяемость, госпитализацию и смертность. Однако эпидемиологические модели, основанные на ложных данных, не могут быть использованы для борьбы с заболеванием, а основанные на них ограничения нарушают основные права человека и свободы личности. Поэтому маркировку людей следует прекратить в срочном порядке и предпринять шаги для повышения осведомленности и уменьшения количества ложноположительных результатов, в частности, путем подтверждения положительных результатов с помощью дополнительных тестов.

Правительства вводят и снимают ограничения на основании заключения экспертов. Однако текущая ситуация показывает, что мнения экспертов ошибочны в отношении основных принципов выявления и передачи инфекции. Это, в свою очередь, поднимает вопрос, чьи интересы на самом деле защищает такой эксперт?

Этот метод еще называют qPCR (quantitative PCR, или количественная ПЦР), поскольку он позволяет не только обнаружить в пробе целевую нуклеотидную последовательность, но и измерить количество ее копий, а значит, и рассчитать, сколько же было исходной матрицы. Этой матрицей может быть как ДНК (qPCR), так и РНК (RT-qPCR). Понятно, что в последнем случае первой стадией будет обратная транскрипция.

ПЦР в реальном времени разработали в 1992 году в Калифорнии сотрудники Roche Molecular Systems [23]. Они добавили в смесь для ПЦР флуоресцентный краситель бромистый этидий (EtBr) и запустили реакцию под ультрафиолетовым светом, который заставлял EtBr светиться. Весь процесс, а следовательно, и усиление свечения при накоплении копий ДНК, исследователи записали на видеокамеру. Затем они смогли подсчитать исходное число копий целевого фрагмента в реакционной смеси.

Метод real-time PCR не требует визуализации продуктов реакции с помощью гель-электрофореза — их накопление фиксируют в реальном времени оптические датчики, вмонтированные в амплификатор и настроенные на определенную длину волны, испускаемую флуоресцирующими метками (рис. 12). При этом используют два типа меток: интеркалирующие агенты («коллеги» EtBr) и зонды с флуорофорами [24].

Бывают случаи, когда в одной пробе необходимо выявить сразу несколько последовательностей. Например, при инфекции несколькими патогенами, при диагностике комплекса заболеваний или при выявлении мутаций (рис. 16). И чтобы не проводить много реакций, экономят время и реактивы — применяют мультиплексную ПЦР (multiplex PCR), то есть ПЦР со множеством праймеров. Суть ее в том, что в одну пробирку с ДНК-матрицей добавляют целый набор праймеров для одновременной амплификации нескольких интересующих фрагментов [24], [33].

ВАЖНО – ПЦР (PCR) тестирование

Это реакция, которую проводят непосредственно в клетках или тканях, например, для изучения внутриклеточного развития вирусов. Сначала клетки или ткань фиксируют на предметном стекле и обрабатывают протеазой, чтобы расщепить белки и освободить ДНК (или РНК, если собираются проводить ОТ-ПЦР). Затем прямо на стекло добавляют смесь для ПЦР и ставят препарат в амплификатор. Выявляют получившиеся фрагменты либо ДНК-гибридизацией, либо иммунологическими методами.

В этой главе опишем наиболее интересные и перспективные методы изотермической амплификации, которые могут составить конкуренцию стандартной ПЦР, если нужно узнать, есть ли в пробе та или иная последовательность. Эти методы особенно полезны для медицины и сельского хозяйства в полевых условиях, когда нужно обнаружить патогены в образцах растительного или животного происхождения. Если же перед экспериментатором стоят генно-инженерные цели, например, клонирование генов, то здесь, конечно, ПЦР вне конкуренции.

• Анализ клинических образцов на наличие инфекционных агентов бактериальной и вирусной природы: ВИЧ, вирусов гепатита и герпеса, хламидий, хеликобактера, туберкулезных микобактерий и т.д.
• Диагностика лейкемии, лимфомы и других видов неоплазий, которые можно определить по мутациям в определенных генах. Мониторинг опухолевых заболеваний после терапии.
• Диагностика наследственных заболеваний, причина которых — мутации отдельных генов: серповидноклеточной анемии, бокового амиотрофического склероза, фенилкетонурии, муковисцидоза, мышечной дистрофии и т.п.
• Персонализированная медицина. Далеко не все лекарства одинаково действуют на всех людей. Одно и то же вещество может помогать одному пациенту и быть токсичным или аллергенным для другого из-за особенностей метаболических процессов у разных людей. Поэтому наиболее эффективны индивидуально подобранные дозировки индивидуально подобранных препаратов. Различия метаболизма обычно обусловлены генетически. Сделав пациенту своеобразный «генетический паспорт» таких особенностей, можно на его основе подбирать правильное лечение [49].
• Тканевая типизация перед трансплантацией органов.
• Обнаружение хромосомных кроссинговеров, делеций, инсерций, транслокаций и инверсий в отдельных сперматозоидах до оплодотворения.

• Установление личности преступников и жертв по ДНК из капель крови, волос и спермы с места преступления.
• Установление отцовства и иного родства.
• Расследование причин необъяснимой смерти («молекулярная аутопсия») — в комплексе с морфологическими и физиологическими данными [24].

Как правильно интерпретировать результаты тестов на COVID-19

Процедура проводится утром натощак, кровь берется из вены.

Пациент должен следовать следующим правилам:

• Не употреблять пищу за 10 часов до процедуры. Разрешается пить только чистую воду.
• Не курить за 4 часа до манипуляции и не употреблять спиртное за сутки до анализа.
• Избегать физических и психологических нагрузок перед процедурой.
• Не принимать лекарственные препараты в течение 2 дней перед забором крови. Если пациент по каким-либо причинам принимал лекарства, то об этом надо уведомить лаборанта (употребление отдельных препаратов вызывает ошибочно положительный результат).

Расшифровка ИФА- и ПЦР-анализа — это задача для гепатолога или инфекциониста. Требуются также результаты биопсии, биохимического анализа крови и УЗИ. Расшифровать результаты ПЦР-анализа может только квалифицированный врач, который должен на их основании назначить терапию. Таблицы расшифровки вирусной нагрузки при гепатите С приводятся ниже.

Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса. ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины). С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.

Второе преимущество ПЦР-анализа — низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).

Каким бы эффективным ни было исследование, у него есть свои минусы:

• В ходе ПРЦ-исследования генетический материал возбудителей (в том числе неживых) реплицируется, а это приводит к искажению результатов. Чтобы оценить эффективность лечения с помощью ПЦР-анализа, повторное исследование проводится как минимум через 2 месяца после предыдущего. Организм пациента должен быть «очищен» от погибших вирусов.
• Тест-системы определяют часть вирусного генома, которая теоретически может принадлежать другим вирусам или микроорганизмам, следовательно, существует вероятность ложноположительного результата.
• Быстрая мутация вирусов иногда опережает способность тестовых систем определять геном возбудителя, следовательно, есть вероятность ложноотрицательного ответа.

Производители лабораторных тест-систем регулярно проводят их испытания, выясняя, как системы реагируют на перекрестные реакции или какой-либо генотип вируса.

У каждого живого существа, по крайней мере, на нашей планете, есть уникальный «отпечаток» — ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), которая отвечает за передачу наследственных факторов от предков к потомкам. Структурно эта молекула представляет собой две нити из молекул-азотитых оснований, удерживаемые рядом друг с другом химическими связями и скрученные в спираль (считается, что для компактности). Из курса биологии вы можете помнить такие названия, как аденин (А), гуанин (Г), тимидин (Т) и цитозин (ц). Это 4 нуклеотида, которые и создают последовательность ДНК. Вирусы хранят свою генетическую информацию в другой нуклеиновой кислоте – РНК.
Информация об уже изученных ДНК и РНК хранится в научных базах лабораторий. После того, как был изобретен метод ПЦР, для многих возбудителей различных заболеваний (бактерии, грибки и вирусы) были созданы свои специфические генетические детекторы (праймеры) — уникальные последовательности нуклеотидов, характерных только для конкретного возбудителя. И если поместить их в пробирку с исследуемым материалом, при наличии в нем ДНК или РНК «живых» возбудителей, праймеры запускают реакцию репликации – создания огромного числа копий, которое можно идентифицировать визуально. Т.е. они начинают копировать свою ДНК/РНК десятки раз.
И при подсчете результатов сотрудники лаборатории могут понять, есть ли искомые бактерии и вирусы в исследуемом образце, или нет, именно поэтому результаты ПЦР чаще всего качественные, т.е. «обнаружено» или «не обнаружено».

12 методов в картинках: полимеразная цепная реакция

Со слов американского биохимика Керри Мюллиса (Kary Mullis), идея идентифицировать живые организмы по короткому участку их генетического кода (ДНК) пришла ему в голову в 1983 году, по пути с работы домой. А в основе этой идеи, лежала работа другого американского биохимика, Артура Корнберга (Arthur Kornberg), которая в свое время не нашла отклика у научного сообщества.

Керри допустил возможность того, чтобы взять молекулу ДНК какого-либо организма, с помощью высокой температуры «распустить» ее спираль на две нити, специфическими маркерами-праймеры пометить уникальные для этого микроорганизма участки ДНК и затем, применив фермент ДНК-полимеразу, создать из двух нитей две новые молекулы ДНК. Но уже содержащие в себе меченные праймеры. И потом останется просто искать эти участки в диагностическом материале.

В итоге, корпорация CETUS, в которой работал Мюлис, выделила ему команду ученых. И в 1985 году, в издании Американского общества генетики человека, появилась публикация с теоретическим обоснованием ПЦР, как метода идентификации генетического материала живых организмов.

Сначала пробу биологического материала подготавливают: центрифугируют, осаждают и т.д. Затем лаборантам необходимо выделить ДНК из полученного биологического концентрата.
Амплификация (увеличение числа копий ДНК)
Важнейший этап исследования. Проводится в термоциклере и именно здесь проходят все процессы, подпадающие под определение полимеразно-цепная реакция: денатурация, отжиг, элонгация.
Денатурация
Самый первый этап – развернуть (денатурировать) нуклеиновые кислоты, чтоб сделать их доступными для дальнейшей работы. Осуществляется путем нагрева реакционной смеси до 80-90 °C.
Отжиг
Денатурированные (распущенные) ДНК/РНК обрабатывают праймерами — изготовленными в лабораторных условиях коротенькими цепочками нуклеиновых кислот. Благодаря запрограммированному участку, праймеры прикрепляются только к тем нуклеиновым кислотам, для которых были созданы. Например, праймер для вируса простого герпеса 1 типа, никогда не свяжется с ДНК другого вируса, микроорганизма или клетки.
Именно праймеры обусловливают крайне высокую специфичность ПЦР – способность реагировать только на нуклеиновые молекулы конкретных типов, видов классов и даже штаммов микроорганизмов. Или отдельные виды клеток живых организмов.

Что касается экспресс-тест-систем, то есть опасения, что созданные в сжатые сроки «уникальные» тесты по своему качеству будут уступать системам, основанным на обычной ПЦР. Насколько надежны эти системы покажет время, однако уже сейчас количество ложноотрицательных результатов ПЦР в совокупности с длительностью ожидания результата привело к тому, что в клиниках страны диагноз стали ставить не на основе ПЦР-анализа, а на основе результатов компьютерной томографии (КТ).

Всем известно из курса биологии, что генетический материал всего живого на Земле представлен двухцепочечной молекулой ДНК (кроме некоторых вирусов, содержащих РНК). Каждая цепочка ДНК состоит из комбинации четырех нуклеотидов. Да-да, нуклеотидов всего 4, но из них составлен генетический материал всех живых существ. Разница лишь в определенной последовательности нуклеотидов в цепочках ДНК. Зная уникальный порядок нуклеотидов в участке ДНК искомого микроорганизма, возможно его выявить в любом биологическом материале.

Принцип ПЦР заключается в многократном удвоении (амплификации) участка ДНК при помощи специальных ферментов.

HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]

Анализ будет готов в течение 4 дней, исключая субботу, воскресенье и день забора. Срок может быть увеличен на 1 день в случае необходимости. Вы получите результаты на эл. почту сразу по готовности.

Заранее

Обсудите с врачом прием лекарственных препаратов накануне и в день проведения исследования крови, а также другие дополнительные условия подготовки.

Не сдавайте анализ крови сразу после рентгенографии, флюорографии, УЗИ, физиопроцедур.

Накануне

За 24 часа до взятия крови:

• Ограничьте жирную и жареную пищу, не принимайте алкоголь.

• Исключите тяжёлые физические нагрузки.

Не менее 4х часов до сдачи крови не принимайте пищу, пейте только чистую негазированную воду.

В день сдачи

Перед забором крови

• 60 минут не курить,
• 15-30 минут находиться в спокойном состоянии.

Гепатит С – заболевание печени, которое вызывается вирусом гепатита С (Hepatit C Virus — HCV). Источниками вируса являются больные всеми формами острого и хронического гепатита С, а также вирусоносители. Около 80% заболевших острым гепатитом С болеют лица в возрасте 15–29 лет. Заразиться можно при инъекциях, абортах, прививках, стоматологических процедурах и т. д. Группы повышенного риска инфицирования: больные, получающие лечение хроническим гемодиализом, больные гемофилией, наркоманией. К группе повышенного риска инфицирования относят и медицинских работников, имеющих контакт с кровью (например, сотрудники отделений гемодиализа). Передача вируса может случиться при родах, менструации, сексуальном контакте, повреждении кожи и слизистых в быту и на производстве.

Начало заболевания гепатитом С постепенное. В продромальном периоде основными симптомами могут быть: слабость, анорексия, тошнота, рвота и др. Так же, как и при гепатите В, могут быть зарегистрированы боли в суставах (15–20%). Это значительно осложняет диагностику. Продромальный период — период заболевания, который протекает между бессимптомным периодом и собственно болезнью.

Часто заболевание переходит в хроническую стадию и обнаруживается в случае профилактических анализов. Хроническое течение болезни приводит к циррозу печени и гепатоцеллюлярной карциноме (рак печени). Страдает не только печень, появляются смешанная криоглобулинемия и другие ревматические заболевания.

Возможно три варианта завершения острого гепатита С:

Выздоровление. У 20% пациентов происходит нормализация показателей работы печени АЛТ, АСТ в течении 6-12 месяцев и исчезает РНК ВГС. В случае выздоровления антитела класса IgM обычно исчезают в течение первых двух месяцев. Антитела класса IgG остаются четыре-восемь лет.

Носительство ВГС. У 20–30% нормализуется уровень АЛТ, АСТ с наличием антител ВГС.

Развитие хронического гепатита. Он регистрируется у 60–70% переболевших острым гепатитом. Причем его развитие не зависит от тяжести течения острого заболевания. Переход острого гепатита С в хронический происходит постепенно. В течение нескольких лет нарастает активность патологического процесса и фиброза печени. Показатели активности АЛТ, АСТ в пределах нормы или незначительно повышены. Показатели общего белка и альбумина в пределах нормы, вплоть до развития цирроза печени. В этот период, продолжительность которого может быть 15–20 лет, пациенты, чаще всего, не считают себя больными.

Раннее обнаружение инфекции возможно с помощью анализа РНК вируса гепатита С в крови методом ПЦР.

Диагноз гепатита С ставит врач на основании данных лабораторных исследований, данных других диагностических исследований и клинической картины заболевания.

Выявить PHK HCV методом ПЦР можно уже через 10–12 дней после инфицирования. Это позволяет исключить или подтвердить инфицирование лиц, которые имели риск заболевания. Выявленный PHK HCV в крови подтверждается факт инфицирования, свидетельствует о размножении вируса в организме.

В период, когда в крови определяется PHK HCV носитель вируса, может быть распространителем, поскольку вирус находится в активной фазе.

Количественное определение РНК с учетом генотипа HCV позволяет контролировать проводимую терапию и прогнозировать течение болезни.

Эффективность лечения оценивается по количеству РНК до и во время терапии. Обычно РНК HCV в крови заметно снижается в первые месяцы лечения.

После окончания курса терапии РНК HCV вируса в крови не обнаруживается. Отсутствие снижения показателя через 12 недель с начала лечения указывает на его неэффективность. Длительность терапии и периодичность количественного определения РНК вируса гепатита С зависит от генотипа вируса и степени повреждения печени. По результатам лечения этот анализ позволяет установить гибель вируса.

Хронический вирусный гепатит С протекает с повышением печеночных ферментов, эти изменения отражают результаты таких анализов как АЛТ, АСТ, билирубин.

Анализ проводится для подтверждения результатов лечения в конце терапии, затем через 6 и 24 месяца наблюдения.

Обратите внимание, что сроки выполнения могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.

• Нет регистратуры — оплачиваете анализы онлайн за 3 минуты
• Вы управляете процессом — можете перенести запись, дозаказать анализы, расшифровать результаты
• Чек шокирует — стоимость анализов в среднем в два раза ниже
• Не обязательно забирать бумажный экземпляр — мы пришлем результаты на эл. почту в момент готовности
• Путь в медцентр не более 20 минут — наша сеть вторая по величине в Москве, мы есть в 26 городах России
• Мы просто, понятно и интересно пишем про показатели здоровья
• В личном кабинете хранятся все ранее полученных результатов, вы легко сравните динамику
• Можно сдавать всей семьей — добавьте членов вашей семьи в личный кабинет и заказывайте для них анализы в пару кликов

Мы работаем с 2012 года в 26 городах России и выполнили уже более 1 000 000 анализов.

В лаборатории внедрена система TrakCare LAB, которая автоматизирует лабораторные исследования и сводит к минимуму влияние человеческого фактора.

Команда Lab4U делает все, чтобы сдавать анализы было просто, удобно, доступно и понятно. Сделайте Lab4U своей постоянной лабораторией.

Для условного определения ВН используют показатель «пороговый цикл», обозначенный в результате анализа как Сt (Сycle threshold). Он показывает, какое количество циклов амплификации произошло до того момента, как количество РНК в образце увеличилось настолько, что стало доступным для того, чтоб прибор смог ее «увидеть». Иными словами, Сt –это и есть тот пороговый цикл, на котором обнаружен вирус. Соответственно, чем больше вирусных частичек в образце, тем быстрее их выявит тест-система. С каждым циклом количество копий удваивается, а ПЦР в реальном времени, как правило, происходит в течение 40 циклов. После каждого цикла оценивают наличие свечения (флюоресценции), исходящее от метки на определенных участках РНК возбудителя. Чем раньше и интенсивнее началось свечение (например, на Сt = 5), тем больше вирусов находится в биологическом материале.
*Число Ct — условный показатель определения вирусной нагрузки

Как понимать полученный результат исследования

ПЦР на гепатит С

• Лабораторная диагностика
• Диагностика COVID-19
• Гинекология
• Урология
• УЗИ
• Косметология
• Лазерная косметология
• Дерматовенерология
• Гастроэнтерология
• Трихология
• Хирургия
• Пульмонология
• Массаж
• Функциональная диагностика
• Педиатрия
• Терапия
• Неврология
• Эндокринология
• Травматология
• Физиотерапия
• Ударно-волновая терапия
• Мануальная терапия
• Маммология
• Сексология
• Психология
• Кардиология

• в совокупности с результатами других исследований определить активность ВГС – инфекции;
• определить необходимость назначения противовирусной терапии;
• оценивать эффективность проводимой терапии;
• проводить мониторинг хронического вирусного гепатита С;
• проводить контроль рецидива инфекции.

Исследование рекомендуется проводить при:

• положительных результатах серологических маркеров вирусного гепатита С;
• положительном результате определения РНК вируса гепатита С;
• приобретенных иммунодефицитах или иммуносупрессивной терапии (лучевая или химиотерапия по поводу онкологических заболеваний, системная терапия глюкокортикостероидами при аллергических или аутоиммунных заболеваниях, программном гемодиализе и др.);
• хроническом вирусном гепатит С.

Метод:

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени.

Чувствительность:

Не менее 15 МЕ/мл.

Линейный диапазон:

От 100 МЕ/мл до 100 000 000 МЕ/мл.

Материал для исследования:

Плазма крови.

Подготовка к исследованию:

Исследование рекомендуется проводить натощак; между последним приёмом пищи и взятием крови должно пройти не менее 6 часов.

Особые условия:

Предварительная запись не требуется.

Формат выдачи результата:

Количество вируса в 1 мл плазмы крови (МЕ/мл, копий/мл)*.

*при выявлении РНК ВГС в количестве менее 100 МЕ/мл – «обнаружено менее 100 МЕ/мл»

Комментарий:

Обнаружение РНК вируса в крови свидетельствует о присутствии вируса в организме.

В диагностике инфекций передаваемых половым путем (ИППП) также используются следующие методики:

• микроскопия — исследование неокрашенных и окрашенных препаратов в светооптическом микроскопе. Точность метода зависит от опыта врача-лаборанта. Как правило хорошо диагностируются гонококки, трихомонады, гарднереллы и кандиды (бактерии больших размеров). Другие инфекции не видны под микроскопом, так как очень маленького размера.
• бактериология — культивирование (выращивание) инфекций на питательных средах. До практического использования ПЦР, бактериальное исследование считалось «золотым стандартом» в диагностике ИППП, т. е. самым точным методом. Большим плюсом данной методики является возможность определения чувствительности микробов к антибиотикам. Минусом — необходимость быстрой доставки клинического материала в лабораторию, пока микробы не погибли в окружающей среде, не все ИППП растут на питательных средах, необходимость использования качественных питательных сред, сроки получения результатов — 5 — 7 дней.
• иммуноферментный анализ — определение специфических антител (белков), вырабатываемых в ответ на внедрение микробов (антигенов) в сыворотке крови. То есть выявляют не сам микроб, а антитела которые вырабатывает организме человека. Плюсом метода является возможность определение стадии инфекционного процесса (в острой стадии определяются иммуноглобулины (антитела) класса М, в хронической — иммуноглобулины класса G). Минусом — отсутствие выработки антител у пациентов с иммунодефицитом, перекрестная реакция антител со схожими микробами, низкие показатели чувствительности и специфичности. На основании результатов только ИФА без подтверждения другими методами диагностики и при отсутствии клинических проявлений выставлять диагноз не представляется возможным.

В настоящее время ПЦР является самым точным методом диагностики инфекционных заболеваний. Точность любого метода диагностики в медицине оценивается такими понятиями как чувствительность и специфичность. Чувствительность — процент положительных результатов среди обследованных инфицированных лиц. Это значит, что при обследовании 100 человек больных хламидиозом методом ПЦР диагноз будет подтвержден у 98-99 человек, а у 1-2 человек из 100 будет установлен ложноотрицательный результат. Чувствительность ИФА в диагностике инфекций передаваемых половым путем — 50-60%. Это значит, что у 40-50 людей из 100 больных хламидиозом возможен ложноотрицательный результат.

Специфичность — процент отрицательных результатов среди обследованных здоровых лиц. Это значит , что при обследовании 100 здоровых людей на хламидии методом ПЦР у 97-98 обследуемых покажет отрицательный результат, а у 2-3 человек возможен ложноположительный результат. Специфичность ИФА составляет 60-70%.
Ниже приведены показатели чувствительности и специфичности методов диагностики инфекций передаваемых половым путем.

Метод диагностики	Чувствительность, %	Специфичность, %
Микроскопия	20 — 60	70 — 80
Бактероилогия	40 — 80	80 — 90
ИФА -серология	50 — 60	60 — 70
ПЦР	98 — 99	97 — 98

Несмотря на высокую точность анализов, не редки случаи получения противоположных результатов в разных ПЦР-лабораториях. Это объясняется многими факторами. Критериями качественной работы лаборатории является:

• использование сертифицированных тест — систем, обладающих высокой аналитической чувствительностью
• использование внутренних и внешних контролей работы лаборатории
• высокая воспроизводимость результатов (95 — 98%)
• современное оборудование
• квалифицированные специалисты
• борьба с контаминацией (загрязнением лаборатории продуктами амплификации)
• правильное расположение «рабочих» зон лаборатории
• при наличии сомнительных результатов и артефактов ПЦР-анализа — их перестановка на различных этапах
• архивирование результатов исследований с возможностью их просмотра в спорных случаях.

Таким образом, только сочетание грамотного специалиста и качественно работающей лаборатории могут обеспечить постановку правильного диагноза и как следствие быстрого и полного выздоровления. Если возникает несоответствие клинической картины с результатами лабораторных исследований, необходимо повторное проведение анализов. Единственное нужно понимать, что подтвердить диагноз, поставленный методом ПЦР, можно только методом ПЦР, выполненным в другой лаборатории или повторно в этой же, так как другие способы диагностики сильно уступают вышеуказанному методу диагностике.

---

Если вы хотите сдать ПЦР-анализы и получить профессиональную диагностику, то специалисты нашей клиники готовы оказать вам действительно качественные услуги.

Аналогично другим вирусным инфекциям, Коронавирус стимулирует гуморальный и клеточный иммунный ответ (IgM и IgG) . После вторжения вируса в организм, в крови больного начинают появляться сначала иммуноглобулин класса M (IgM), позднее – иммуноглобулин класса G (IgG), после чего активируется иммунитет и клетки иммунной системы атакуют собственные клетки, зараженные вирусом.

Для получения ответа на вопрос инфицирован ли пациент в данный момент, подвергался ли человек воздействию вируса и развился ли у него иммунный ответ, необходимо применение тестов на выявление антител (Ig G, Ig M, Ig A) к конкретному вирусу. В основе таких тестов лежат методы иммуноферментного анализа (ИФА), иммунохроматографии (ИХА) и их аналогов.

Антитела класса М появляются в острой фазе заболевания и снижаются после выздоровления. Антитела класса G появляются на 7 сутки от начала заболевания и держатся длительное время, продолжительность этого времени еще неизвестна.

Экспресс-тесты — это качественные или полуколичественные способы диагностики, которые дают ответ лишь на вопрос, имеются ли признаки присутствия коронавируса в организме пациента и, фактически, не дают возможность оценить количество возбудителя.

Экспресс тесты проводятся методом иммунохроматографии (ИХА), не требуют использования специального оборудования, но требуют присутствие медсестры, так как забор крови производится из пальца. Продолжительность процедуры анализа находится в пределах 10-30 минут

Положительный результат такого теста требует обязательной проверки методом ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Существует два типа быстрых тестов на COVID-19:

• тесты непосредственного выявления антигена SARS-CoV-2, которые установят наличие компонентов самого вируса (например, белковой оболочки)
• тесты выявления антител (они наиболее распространенные в экспресс-диагностике) — это непрямые тесты по выявлению иммуноглобулинов в крови — IgM и IgG.

Процедура анализа чрезвычайно проста:

1. Собрать в пробирку пробу крови или плазмы или сыворотки.
2. Добавить каплю пробы в специальное углубление на панели с тестовой лентой.
3. Капнуть в углубление 2-3 капли буферного раствора.
4. Через 15 минут получаем результат — это появление окрашенных участков на тестовой ленте. Участки показывают или отрицательный результат, или наличие иммуноглобулинов IgM и IgG, как отдельно, так и обоих вместе.

Непрямой иммуноферментный анализ (ИФА) – полуколичественный анализ, им определяется количество выявленных антител IgM и IgG. Берется венозная кровь, а для исследования используется сыворотка крови.

Показания для назначения анализа на антитела к коронавирусу COVID-19:

1. Диагностика заболевания.
2. Определение иммунитета.
3. Получение информации о перенесенном заболевании с бессимптомным течением.
4. Отбор доноров для переливания крови пациентам с тяжелой формой заболевания.
5. Определение стадии заболевания, периода заразности для окружающих.

В двух словах, чем отличается ИФА и ИХА? В каком случае достаточно эксперсс теста (ИХА), а когда нужно точно делать количественный (ИФА)?

Это сложный вопрос. Экспресс тесты — высокая специфичность (почти 100%), т.е. срабатывает только на COVID-19, но низкая чувствительность (71%). А метод ИФА более чувствительный, но менее специфичный. Это очень тонкие различия и пациенту они не нужны. Экспресс тест — это быстро, можно охватить большой коллектив, быстро получить ответ. А анализ из вены — более основательно.

Кроме указанных выше специфических анализов, у больных коронавирусной инфекцией, и для лиц с подозрением на это заболевание, определяют газы, растворенные в крови, печеночные и почечные пробы, миоглобин, ферменты миокарда, скорость оседания эритроцитов, С-реактивный белок, общий анализ мочи и проводят другие исследования, которые позволяют уточнить состояние пациента и назначить нужное лечение.

Похожие записи:

• ДТП с причинением тяжкого вреда здоровью статья
• Нужно ли вступать в права наследства если наследства нет
• Как составить соглашение о возмещении ущерба в ДТП